Stanovení obsahu kyseliny šťavelové v ovoci a zelenině pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC)
1. Experimentální princip a návrh metody
Kyselina šťavelová, běžná organická kyselina v ovoci a zelenině, má přímý vliv na chuť a nutriční hodnotu potravin. Tento experiment využívá vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii s reverzní fází (RP-HPLC). Za kyselých podmínek mobilní fáze je kyselina šťavelová oddělena od interferujících látek od základní linie pomocí chromatografické kolony C18. Pro kvantitativní analýzu, založenou na UV absorpčních charakteristikách karboxylových skupin v molekulách kyseliny šťavelové, se používá ultrafialový detektor nastavený na 210 nm.
2. Standardní křivka a příprava vzorku
Pro přípravu standardních roztoků se používá metoda gradientního ředění: přesně se naváží 25,0 mg dihydrátu kyseliny šťavelové a zředí se ultračistou vodou na 25 ml, čímž se získá zásobní roztok o koncentraci 1 mg/ml. Ten se postupně ředí do série standardních roztoků o koncentraci 50, 100, 200, 400 a 800 µg/ml, přičemž každá koncentrace se injikuje trojmo.
Pro přípravu vzorku se používá mikrovlnná extrakce: naváží se 5,00 g homogenátu ovoce/zeleniny, přidá se 10 ml roztoku kyseliny chlorovodíkové o koncentraci 0,1 mol/l, zahřívá se 10 minut při 60 °C v mikrovlnné troubě, filtruje se přes membránový filtr s póry 0,45 µm a filtrát se odebere k testování.
3. Optimalizace chromatografických podmínek
Mobilní fáze je systém 0,01 mol/l dihydrogenfosforečnan draselný (pH 2,5)-acetonitril (95:5) s průtokem 0,8 ml/min a teplotou kolony 35 °C. Úprava poměru acetonitrilu ukazuje, že když organická fáze překročí 10 %, retenční čas kyseliny šťavelové se zkrátí na méně než 3 minuty, ale dochází k odštěpení píku. Za konečných optimalizovaných podmínek je retenční čas kyseliny šťavelové 4,2 minuty, čímž se dosahuje úplné separace od sousední kyseliny citronové a kyseliny jablečné (rozlišení > 1,5).
4. Validace metody
Ověření lineárního rozsahu ukazuje dobrý lineární vztah mezi plochou píku a koncentrací v rozsahu 10–1000 µg/ml (R² = 0,9993). Mez detekce (LOD), stanovená metodou poměru signálu k šumu, je 0,5 µg/ml. V testech opakovatelnosti je RSD pro šest opakovaných stanovení stejného vzorku špenátu 1,8 %. Experimenty s výtěžností hrotu na třech úrovních (80 %, 100 % a 120 %) poskytují průměrnou výtěžnost 98,2 %, 102,4 % a 97,8 %, což splňuje požadavky pro kvantitativní analýzu.
5. Analýza reálných vzorků
Bylo testováno šest komerčně dostupných druhů ovoce a zeleniny: špenát (356 ± 12 mg/100 g), celer (215 ± 9 mg/100 g), rajče (18 ± 2 mg/100 g), jablko (6 ± 1 mg/100 g), banán (nedetekován) a brokolice (89 ± 5 mg/100 g). Srovnání s národní standardní metodou (GB 5009.277-2016) ukazuje, že relativní odchylka mezi oběma metodami je menší než 5 %, což potvrzuje spolehlivost této metody. Zejména metoda HPLC vykazuje vyšší citlivost než tradiční titrační metody při analýze vzorků s nízkým obsahem.
6. Klíčové poznámky
Během předúpravy vzorku přísně kontrolujte hodnotu pH. Pokud pH extraktu překročí 3, srážení oxalátu vápenatého povede k nízkým výsledkům testu. Mobilní fáze by měla být připravována čerstvá denně, aby se zabránilo srážení solí a ucpání kolony. Po každých 20 nástřikech propláchněte kolonu směsí acetonitrilu a vody (30:70) po dobu 30 minut, aby se zabránilo snížení účinnosti kolony. U vzorků obsahujících pigmenty (např. fialové zelí) se doporučuje před nástřikem přidat krok čištění extrakcí na pevné fázi.
7. Pokyny pro aplikaci a rozšíření
Tuto metodu lze rozšířit na detekci kyseliny šťavelové v biologických vzorcích, jako je moč a krev. Úpravou složení mobilní fáze (např. přidáním hydroxidu tetrabutylamonného) lze současně stanovovat kyselinu šťavelovou a její metabolity. V kombinaci s hmotnostním spektrometrickým detektorem lze zavést přesnější metodu stopové detekce. V potravinářském průmyslu může tato metoda poskytnout důležitou datovou podporu pro výběr odrůd s nízkým obsahem kyseliny šťavelové a optimalizaci varných procesů.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – kyselina šťavelová
Společnost Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. je spolehlivým dodavatelem a vývozcem vysoce kvalitní kyseliny šťavelové (průmyslové kvality, min. 99,6 %) z čínské provincie Shandong. Naše kyselina šťavelová je bílá krystalická pevná látka, známá také jako kyselina ethandiová, s molekulárním vzorcem C₂H₂O₄. Vyznačuje se vysokou čistotou, nízkým obsahem nečistot a stabilní kvalitou napříč šaržemi, čímž splňuje požadavky textilního, kožedělného, metalurgického, průmyslu zpracování vzácných zemin, chemického čištění a stavebnictví.
Dodáváme bezvodou i dihydrát kyseliny šťavelové, dostupnou v pytlích o hmotnosti 25 kg, 50 kg a 1000 kg. Díky přísným postupům kontroly kvality, kompletním zkušebním protokolům a flexibilním plánům dodávek zajišťujeme stabilní dodávky a konzistentní výkon pro globální kupující. Naše produkty byly široce vyváženy do jihovýchodní Asie, Evropy, Afriky a Ameriky a získaly si uznání za spolehlivou kvalitu a konkurenceschopné ceny.
Zvolte si Zibo Anhao Chemical pro spolehlivé dodávky kyseliny šťavelové a profesionální komplexní chemické služby.
Zvolte si Zibo Anhao Chemical, pokud hledáte vysoce čistou kyselinu šťavelovou, která vašemu podnikání poskytuje stabilní výkon a hodnotu. Kontaktujte nás pro hromadné objednávky nebo technické specifikace: info@anhaochemical.com
